产品货号:
WH0023
中文名称:
动物源性植物饲料基因组DNA提取试剂盒(离心吸附柱法)
英文名称:
Feedstuff Animal DNA Extraction Kit
产品规格:
50次|200次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,可从多种动物源性植物饲料中提取基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为新型材料,高效、专一吸附DNA,可有效去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可适用于包括酶切、PCR在内的分子生物学实验。

- 简单快速:1小时内即可获得高质量的基因组DNA。
- 适用广泛:适用于动物源性植物饲料、多种动物细胞和动物组织等。
- 纯度高:获得的DNA可直接用于PCR、酶切等分子生物学实验。

| 组分 | 50T | 200T |
| 缓冲液GA | 30mL | 2×50mL |
| 缓冲液GB | 30mL | 2×50mL |
| 缓冲液GD | 13mL | 52mL |
| 漂洗液PW | 15mL | 50mL |
| 洗脱缓冲液TE | 15mL | 60mL |
| Proteinase K | 1mL | 4×1mL |
| 吸附柱CB3 | 50个 | 200个 |
| 收集管(2mL) | 50个 | 200个 |
保存:室温,有效期1年。

RNase A溶液(货号:WH0217)

- 若溶液产生沉淀,必要时可在37℃水浴中预热10min以溶解沉淀,并摇匀后使用,不影响实验结果。
- 所有离心步骤均为室温下离心。
- 使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。

- 处理材料:50mg研磨粉碎的动物源性饲料加入320μL缓冲液GA,振荡至彻底悬浮。
- 如果需要去除RNA,可加入4μLRNase A溶液,振荡15sec,室温放置5min。
- 加入20μL Proteinase K溶液,混匀。在65℃放置20~30min,其间混匀样品2~3次。
- 加入340μL缓冲液GB,充分颠倒混匀,65℃放置10min,其间混匀样品2~3次。
- 如果第2、3步中65℃温浴期间离心管底出现沉淀,请将沉淀振荡至彻底悬浮后再进行65℃水浴操作。
- 12000rpm (~13400×g)离心2min,取440μL上清至新管中。
- 若所取上清中有可见悬浮颗粒,则无水乙醇加到上清体积的1/2。例如:取500μL上清,加入250μL无水乙醇。
- 向上清中加入220μL无水乙醇,充分颠倒混匀6~8次,此时可能会出现絮状沉淀。
- 若所取上清体积小于或大于440μL,则无水乙醇应加到上清体积的1/2。例如:取500μL上清,加入250μL无水乙醇。
- 将上一步所得溶液和絮状沉淀全部加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12000rpm(~13400×g)离心2min,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。
- 离心时间请不要少于2min,否则可能会导致吸附柱堵塞,如果离心时出现吸附柱堵塞情况时,请再次12000rpm(~13400×g)离心2min。
- 向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。
- 向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm(~13400×g)离心30sec,倒掉废液,将吸附柱CB3放入收集管中。
- 重复操作步骤8。
- 将吸附柱CB3放回收集管中,12000rpm(~13400×g)离心2min,倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
- 这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
- 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50~200μL洗脱缓冲液TE,室温放置2~5min,12000rpm(~13400×g)离心2min。
- 为增加基因组DNA的得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室温放置2min,12000rpm(~13400×g)离心2min。洗脱缓冲液体积不应少于50μL,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液应保证其pH值在7.0~8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率;且DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

DNA浓度及纯度检测:
- 得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
- DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50μg/mL双链DNA、40μg/mL单链DNA。
- OD260/OD280比值应为1.7~1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用ddH2O,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。
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